
蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)可檢測蛋白,判斷導(dǎo)入的目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)分子量的蛋白以及表達(dá)蛋白量是否符合預(yù)期要求
1從動(dòng)物細(xì)胞、人或動(dòng)物組織、細(xì)菌、植物等樣品中提取蛋白,重組蛋白、血清、培養(yǎng)上清等樣品。
2對(duì)樣品中蛋白進(jìn)行半定量分析
3Western blot檢測
(1) 電泳:聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)分離蛋白樣品
(2) 濕法轉(zhuǎn)印(BLOTING:Tank Transfer)
(3) 雜交:用抗體鑒定膜上的特定蛋白(INCUBATION: Antibody)
(4) 化學(xué)發(fā)光檢測(ECL),膠片曝光,TotalLab Quant軟件讀取IOD值(可選)
4預(yù)實(shí)驗(yàn)及正式實(shí)驗(yàn)服務(wù):幫助客戶設(shè)計(jì)樣品上樣順序以符合論文發(fā)表要求
5免費(fèi)進(jìn)行蛋白內(nèi)參檢測(所有內(nèi)參抗體均免費(fèi)提供)
| 服務(wù)項(xiàng)目 | 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn) | 實(shí)驗(yàn)周期 | |
| 預(yù)實(shí)驗(yàn) | 蛋白抽提(總蛋白) | 60/樣本 | 1周 |
| 胞漿、胞核蛋白分開抽提 | 100/樣本 | 1周 | |
| 蛋白定量 | 25/樣本 | 1周 | |
| Western Blot(含胞漿蛋白內(nèi)參) | 1000/目的蛋白 | 2周 | |
| 正式實(shí)驗(yàn) | 蛋白抽提(總蛋白) | 60/樣本 | 1周 |
| 蛋白定量 | 25/樣本 | 1周 | |
| Western Blot(含胞漿蛋白內(nèi)參) | 1000/目的蛋白 | 2周 | |
| IOD讀取 | TotalLab Quant讀取條帶IOD值及計(jì)算 | 200/條帶 | 2周 |
1新鮮或正確保存的樣品(按照我們的要求提供)
2目的蛋白一抗:我們可以給客戶免費(fèi)提供抗體查找服務(wù)
3陽性對(duì)照樣品(盡量提供)
4相關(guān)文獻(xiàn)(可選)
1預(yù)實(shí)驗(yàn)曝光結(jié)果(膠片及掃描圖),預(yù)實(shí)驗(yàn)采取3個(gè)一抗稀釋度
2正式實(shí)驗(yàn)曝光結(jié)果(膠片及掃描圖)
3完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告
4IOD值分析報(bào)告(可選)
客戶要求加可曝光marker的,需事先說明,并按照可曝光項(xiàng)目收費(fèi)。
1、提供的蛋白量與目的待檢測的蛋白數(shù)量有關(guān),蛋白數(shù)量增加相應(yīng)的樣品量也要增加。
2、胞漿、胞核蛋白抽提樣品來源為:哺乳動(dòng)物細(xì)胞、動(dòng)物組織。如果1個(gè)樣品分別提取胞漿、胞核蛋白后,蛋白定量時(shí)以2個(gè)樣品計(jì)算。
3、每張膜樣品數(shù)量為1-8個(gè),不足8個(gè)以8個(gè)收取。9-16個(gè)樣品為2張膜,17-24個(gè)樣品為3張膜;以此類推。
舉例:7個(gè)樣品,1個(gè)目的蛋白,算1張膜;有9個(gè)樣品,1個(gè)目的蛋白,算2張膜
7個(gè)樣品,2個(gè)目的蛋白,算2張膜,有9個(gè)樣品,2個(gè)目的蛋白,算4張膜
以上為一般算法。如果客戶樣品數(shù)量需要按照組別等來進(jìn)行上樣時(shí)需要重新確定每張膜的上樣量及膜的張數(shù)。
4、選擇部分樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),參考目的蛋白一抗說明書進(jìn)行3個(gè)稀釋度的預(yù)實(shí)驗(yàn)。
5、向客戶反饋預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,等待客戶確認(rèn)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果后確定是否進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。
6、請您提供質(zhì)量保證的一抗(或委托我公司代購)??贵w的使用量通過預(yù)實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行確認(rèn),一般不回收使用一抗。
7、如果需要對(duì)膜上目的蛋白進(jìn)行抗體剝離(洗脫或者 stripping)的,請?zhí)崆罢f明
8、建議提供目的蛋白陽性表達(dá)樣品(純蛋白、有陽性表達(dá)的細(xì)胞或組織、商品化的陽性對(duì)照產(chǎn)品等)作為陽性對(duì)照。
9、免費(fèi)內(nèi)參檢測為:beta-actin,beta-tubulin,GAPDH,Histone H3, Lamin B1等。
10、如需進(jìn)一步數(shù)據(jù)分析TotalLab Quant專業(yè)軟件讀取IOD值、條帶的Normalization處理、以及發(fā)表論文時(shí)所用條帶的處理,請另詢價(jià)
11、對(duì)條帶結(jié)果有特殊要求,請另詢價(jià)。
12、雙方簽訂合同后,收取70%首付后啟動(dòng)預(yù)實(shí)驗(yàn)。
13、WB特殊要求請咨詢。

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