品牌簡介：
      神經(jīng)元PAS結(jié)構(gòu)域蛋白4（Npas4），也稱為Le PAS、NXF、PASD10、bHLHe79，是PER ARNT SIM（bHLH PAS）類轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子中的一員。Npas4由神經(jīng)元特異性即刻早期基因（IEG）Npas4編碼，該基因受到神經(jīng)元活動的強烈誘導。與cfos等傳統(tǒng)IEG不同，npas4對cAMP或神經(jīng)營養(yǎng)因子等旁分泌因子的刺激沒有反應（Lin等人，2008）。此外，Npas4表達比其他IEG更快速、更短暫（Ramamoorthi等人，2011）。這種對神經(jīng)元活動的緊密調(diào)節(jié)使Npas4成為大腦中神經(jīng)元活動的理想標志物。Activity Signaling 為神經(jīng)學研究供應重組Npas4單抗，用于神經(jīng)元檢測研究。
NPAS4 背景簡介：
       神經(jīng)元活性參與信號通路，產(chǎn)生基因表達的改變，導致神經(jīng)元的長期適應性變化，這種變化是行為可塑性的基礎。自從30多年前發(fā)現(xiàn)去極化作用可以驅(qū)動C-Fos基因的轉(zhuǎn)錄以來，關(guān)于興奮-轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)機制有大量研究。突觸傳遞過程中通過NMDA受體進入的Ca²⁺離子和隨后去極化的L型電壓依賴性鈣通道充當?shù)诙攀?，參與各種信號轉(zhuǎn)導途徑，激活轉(zhuǎn)錄因子以驅(qū)動早期基因的轉(zhuǎn)錄。
Fos、arc和egr1（zif268）等傳統(tǒng)IEG已被用作環(huán)境刺激驅(qū)動的神經(jīng)元活動的替代標記，通過原位雜交、免疫染色或轉(zhuǎn)基因動物等技術(shù)鑒定最近活躍的神經(jīng)元。這些神經(jīng)元的功能重要性在最近的研究中得到了證明，這些研究利用fos的活性依賴性，在恐懼條件反射期間激活的神經(jīng)元群中表達基因編碼的光遺傳工具或設計藥物受體。隨后對這些神經(jīng)元群的人工激活足以模擬恐懼反應 。
雖然傳統(tǒng)的IEG在識別活動依賴性回路方面發(fā)揮了重要作用，但這些基因的表達可能并不完全適應神經(jīng)元活動。傳統(tǒng)的IEG轉(zhuǎn)錄是對突觸活動和Ca2+進入的反應，也是對生長因子信號、神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)調(diào)節(jié)劑通過cAMP信號的反應。

      相比之下，Michael Greenberg的實驗室表明，神經(jīng)元特異性IEG npas4是由神經(jīng)元活動強烈而迅速誘導的，但對旁分泌因子沒有反應。這種對神經(jīng)元活動的緊密調(diào)節(jié)表明，Npas4可以成為神經(jīng)元活動的更特異的標志物。
為了尋找更多對npas4等活性進行純調(diào)節(jié)的基因，我們對原代培養(yǎng)的小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元進行了RNA-Seq實驗，并比較了突觸活性或cAMP驅(qū)動的表達。

      傳統(tǒng)的IEGs被突觸活性和cAMP上調(diào)。正如預期的那樣，npas4被突觸活性上調(diào)。事實上，在檢測到的所有約15000個轉(zhuǎn)錄本中，npas4基因是誘導活性最高的，但正如Greenberg實驗室所預測的那樣，cAMP不會上調(diào)npas4。重要的是，沒有發(fā)現(xiàn)任何其他對神經(jīng)元活動表現(xiàn)出類似調(diào)節(jié)的基因。
     為了研究體內(nèi)npas4的誘導，我們進行了情境恐懼條件反射（cFC）實驗，并用qPCR和RNA-Seq測量了海馬和脾后皮質(zhì)（RSC）中的基因表達，這兩個腦區(qū)已知與學習和記憶有關(guān)。在這些實驗中，動物沒有習慣于恐懼條件反射箱，相對于小鼠居住籠的反應代表了對編碼模塊，而不是恐懼記憶本身。訓練后對fos、arc和npas4誘導的時間過程的檢查表明，兩個腦區(qū)的npas4 mRNA水平在1小時內(nèi)恢復到基線水平，而fos和arc表達在較長時間內(nèi)保持升高。

       這與Yingxi Lin實驗室的數(shù)據(jù)一致，該數(shù)據(jù)顯示，在cFC訓練后，這三個基因的結(jié)果相似。此外，他們發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元中的急性npas4敲除阻止了fos、arc和zif268/egr1的誘導，這表明npas4是活性依賴性基因誘導的主要調(diào)節(jié)因子。
      為了證明脾后皮質(zhì)中的IEG誘導是由cFC期間NMDA受體的激活誘導的，我們進行了實驗，將小鼠暴露于NMDAR拮抗劑MK-801或賦形劑對照溶液中。重要的是，盡管進行了大量的預處理，但傳統(tǒng)的IEG如arc、fos和egr1在注射后仍增加了表達，這可能是由于經(jīng)驗導致的。
       
      有趣的是，載體注射后npas4沒有增加。所有IEG，包括對cFC的反應，都增加了它們的表達。用MK-801阻斷NMDAR可以部分阻止傳統(tǒng)IEG表達的增加，而npas4的增加完全取決于NMDAR的激活。綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明npas4對載體注射激活的途徑?jīng)]有反應。相反，npas4對cFC有選擇性反應，并提供更高保真的突觸活動讀數(shù)。
     上述數(shù)據(jù)充分表明，傳統(tǒng)IEG對神經(jīng)元活動本身以外的信號有反應。另一個類似的發(fā)現(xiàn)來自對晝夜節(jié)律周期中IEG調(diào)節(jié)的研究。有趣的是，發(fā)現(xiàn)海馬體中傳統(tǒng)IEGs fos和arc的表達水平具有晝夜節(jié)律，在光暗周期內(nèi)一致波動，而npas4轉(zhuǎn)錄水平保持相對恒定。
     
      這些數(shù)據(jù)進一步支持了除對環(huán)境線索的急性神經(jīng)元活動反應之外的因素控制傳統(tǒng)IEG表達水平的觀點。
最后，鑒于npas4相對于fos和其他傳統(tǒng)IEG的獨特調(diào)節(jié)，以及c-fos非常普遍用于標記被認為是“記憶痕跡”或“印跡”的活動依賴性神經(jīng)元集合的事實，我們想確定npas4和fos是否標記了相同的神經(jīng)元群。為此，我們進行了RNAScope原位雜交實驗，觀察cFC后的兩個轉(zhuǎn)錄本。在海馬體的齒狀回區(qū)域，發(fā)現(xiàn)了一個明顯重疊的最近激活的神經(jīng)元群。
       
然而，在CA1區(qū)，我們看到不同神經(jīng)元群體的跡象可能用兩種不同的基因標記。這些數(shù)據(jù)是初步的，不能用于得出明確的結(jié)論，但它們確實明確提出了僅依靠c-Fos來識別最近激活的神經(jīng)元系綜的問題，尤其是最近將c-Fos表達等同于“印跡細胞”的趨勢。
 NPAS4 抗體驗證：

圖1.去極化誘導Npas4在原代神經(jīng)元培養(yǎng)物中的表達。8次DIV后，通過用TTX阻斷動作電位或用KCl輕度去極化45分鐘來沉默原代培養(yǎng)的胚胎小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元。輕度去極化利用Ca2+介導的信號機制誘導Npas4轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)表達。神經(jīng)元細胞體和樹突用Sigma的抗Map2-Ab（HM-2）標記，Npas4用活性信號Npas4-Ab標記。

圖2.分離小鼠海馬培養(yǎng)物中的抗體驗證。神經(jīng)元網(wǎng)絡的活動是通過阻斷GABAA受體拮抗劑Bicuulline的抑制性突觸傳遞來驅(qū)動的。A） 正如預期的那樣，在未刺激的培養(yǎng)物中，抗Npas4-Ab沒有出現(xiàn)免疫反應性，而在驅(qū)動興奮性突觸活動后，可以看到強烈的信號。B） 在未刺激的對照培養(yǎng)物中，不存在Npas4免疫反應性，然而，AAV感染后小鼠Npas4的過表達導致Npas4條帶突出。
產(chǎn)品訂購：
       神經(jīng)元PAS結(jié)構(gòu)域蛋白4（Npas4），也稱為Le PAS、NXF、PASD10、bHLHe79，是PER ARNT SIM（bHLH PAS）類轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子中的一員。Npas4由神經(jīng)元特異性即刻早期基因（IEG）Npas4編碼，該基因受到神經(jīng)元活動的強烈誘導。與cfos等傳統(tǒng)IEG不同，npas4對cAMP或神經(jīng)營養(yǎng)因子等旁分泌因子的刺激沒有反應（Lin等人，2008）。此外，Npas4表達比其他IEG更快速、更短暫（Ramamoorthi等人，2011）。這種對神經(jīng)元活動的緊密調(diào)節(jié)使Npas4成為大腦中神經(jīng)元活動的理想標志物。Activity Signaling 為神經(jīng)學研究供應重組Npas4單抗，用于神經(jīng)元檢測研究。
 

品牌	Activity Signaling
產(chǎn)品名稱	Recombinant anti Npas4 Rabbit Mab
貨號	AS-AB18A-100/AS-AB18A-300
規(guī)格	100ul/300ul
靈敏度/特異性	通過原代神經(jīng)元的免疫細胞化學、腦切片的免疫組織化學和蛋白質(zhì)印跡評估，這種抗Npas4抗體具有最小的非特異性背景結(jié)合。此外，npas4-KO小鼠的免疫反應性完全喪失。小鼠睪丸的免疫反應性已經(jīng)得到證實。未在其他物種中進行測試。
抗體濃度	1mg/ml (無菌PBS),100ul
產(chǎn)品應用	建議神經(jīng)元染色，免疫組化、Western Blot工作濃度起始濃度1:500-1:2000。最佳稀釋比根據(jù)實驗具體優(yōu)化確定。
產(chǎn)品保存	冰塊運輸，短期4℃保存，長期-20℃分裝凍存。

 
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