FinaBio CRM 作為載體蛋白優(yōu)于 KLH

CRM 優(yōu)于 KLH 作為載體蛋白 197，使用 Fina Biosolutions 的 CRM，EcoCRM 改善免疫應(yīng)答和療效。197®鑰孔血藍(lán)蛋白 (Keyhole limpet hemocyanin，KLH) 因其極強(qiáng)的免疫原性和易于獲得而常被用作載體蛋白。然而，由于其多絲起源和較差的表征，天然 KLH 不是理想的載體。相比之下，遺傳解毒的白喉毒素 CRM 是 58.4 kDa 的重組蛋白，也具有高度免疫原性。通過(guò) MALDI-TOF 質(zhì)譜可以很容易地表征藥物和肽 CRM 偶聯(lián)物。我們的研究表明，用 Fina Biosolutions 的 CRM，EcoCRM 制成的結(jié)合物的免疫原性等于或優(yōu)于 KLH 的結(jié)合物。®197 197 作為一種極大的外源蛋白，KLH 誘導(dǎo)自身和與其連接的分子產(chǎn)生極高的抗體滴度。然而，KLH 是從海蝸牛的血液中獲得的，使得規(guī)模擴(kuò)大和臨床使用具有挑戰(zhàn)性。它是一種混亂的、有點(diǎn)不明確的聚合蛋白，這使得很難對(duì)其進(jìn)行表征。此外，KLH 在低鹽和中性 pH 溶液中的溶解度較差，KLH 結(jié)合物的質(zhì)量控制存在問(wèn)題。目前尚無(wú)使用 KLH 作為載體蛋白的許可疫苗。相反，CRM 是一種基因解毒的白喉毒素，在細(xì)菌中重組產(chǎn)生，為 58.4 kDa 的定義明確的蛋白。CRM 用于多種許可疫苗，包括 Prevnar。Fina Biosolutions 開發(fā)了一種獨(dú)特的大腸桿菌菌株，其以高產(chǎn)率將 CRM 表達(dá)為一種可溶性、適當(dāng)折疊的細(xì)胞內(nèi)蛋白。該蛋白以大腸桿菌 CRM 的商品名“EcoCRM”上市。EcoCRM 可用于研究和臨床。

我們一致發(fā)現(xiàn) EcoCRM 偶聯(lián)物誘導(dǎo)的抗體應(yīng)答等于或大于 KLH 偶聯(lián)物。此外，與 KLH 不同，CRM 結(jié)合物可通過(guò) SDS PAGE 和質(zhì)譜進(jìn)行表征。®197 我們的研究表明，用 EcoCRM（Fina Bio 的 CRM）制備的結(jié)合物的免疫原性與用 KLH 制備的結(jié)合物相當(dāng)。

A. MALDI-TOF 法表征載體蛋白和結(jié)合物。與半抗原偶聯(lián)前 (A1) 和偶聯(lián)后 (A2) 分析 EcoCRM® 載體蛋白。使用在高質(zhì)量線性模式下操作的 Applied Biosystems/MDS SCIEX 54800 MALDI TOF/TOF 分析儀分析樣品。

B. 抗體半抗原 IgG 反應(yīng)。在第 0、14 和 28 天，用 1 mg 明礬佐劑配制的 100µg 未結(jié)合 KLH（對(duì)照）、Hapten-KLH 或 Hapten-EcoCRM s.c. 免疫 BALB/c 小鼠（n≥4 只/組）。ELISA 法測(cè)定抗半抗原滴度。

Example 2. Peptide Conjugates

肽 PepL1 與 FinaBio 的即用型結(jié)合物 CRM-馬來(lái)酰亞胺或 KLH（由肽合成公司）結(jié)合。即用型結(jié)合物 CRM-馬來(lái)酰亞胺極大地促進(jìn)了 EcoCRM 結(jié)合物的合成。如圖所示，與 KLH 結(jié)合物相比，CRM 結(jié)合物產(chǎn)生了極好的抗肽抗體應(yīng)答。小鼠在接種疫苗后產(chǎn)生免疫反應(yīng)，并用靶向伯克霍爾德菌表面 OMP 的肽-蛋白 +/-佐劑增強(qiáng)免疫反應(yīng)。AddaVax 佐劑 (~MF59)。FinaBio 的 Ready-to-conjugate CRM 對(duì)結(jié)合物的響應(yīng)顯著高于 KLH。還應(yīng)注意，即使不存在佐劑，CRM 結(jié)合物也具有免疫原性。